마이크로 피펫 구조 | [사용 설명서] 마이크로피펫 사용설명서 + 달달한 꿀팁 첨가! 모든 답변

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1) Plunger buutton: 액체를 취하거나 옮길 때 누르는 버튼으로 상단에 옮길 수 있는 용량 범위가 적혀 있음. 4) Volume adjustment knob : 회전 시, Digital volume indicator의 숫자를 변경할 수 있음.

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2020.10.23. 남돈내산 마이크로피펫 (파이펫) 사용 설명서.
[BGM]🎵Music provided by 브금대통령
🎵Track : A Boring Day – https://youtu.be/RJNakI_wb5U

마이크로 피펫 구조 주제에 대한 자세한 내용은 여기를 참조하세요.

피펫 – 나무위키

눈금 피펫과 홀 피펫. 2.2.1. 사용법. 2.3. 마이크로 피펫. 2.3.1. 사용법. 2.3.1.1. forward pipetting2.3.1.2. reverse pipetting. 3. 관련 문서 …

+ 여기에 보기

Source: namu.wiki

Date Published: 6/5/2022

View: 8446

[특허]마이크로 피펫 – ScienceON

… 감쇠기구를 포함하는 마이크로 피펫을 제공한다. 따라서, 샘플용액 흡입시 에어로졸 현상을 방지하여 마이크로 피펫의 오염을 방지할 수 있으며, 경제적이다.

+ 여기에 자세히 보기

Source: scienceon.kisti.re.kr

Date Published: 8/8/2021

View: 8738

[후배에게 주고 싶은 면역학 연구 노트] #7_파이펫 사용법 – BRIC

바로 ‘그 파이펫’의 명칭은 Air displacement pipette (공기 치환 파이펫)입니다. 파이펫 안에 있는 피스톤에 의해 생기는 에어쿠션(Air cushion)이 …

+ 여기에 표시

Source: www.ibric.org

Date Published: 11/11/2021

View: 3741

마이크로 피펫 이란

눈금 피펫과 홀마이크로피펫 (Micro pipette)이란 액체를 옮기는데 사용하는 … 마이크로피펫은 아래의 사진과 같은 모양 및 구조를 지니고 있습니다 …

+ 더 읽기

Source: nosuneza.cryopulsecagnes.fr

Date Published: 12/6/2021

View: 1949

피펫 – 위키백과, 우리 모두의 백과사전

또한 액체나 기체의 부피를 정밀하게 측정할 수 있다. 눈금 피펫과 홀 피펫, 마이크로 피펫 등이 있다. 정밀한 양을 옮기기 위해 고안된 기구이므로 100mL 정도의 용액을 …

+ 여기에 표시

Source: ko.wikipedia.org

Date Published: 11/15/2022

View: 4014

주제와 관련된 이미지 마이크로 피펫 구조

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[사용 설명서] 마이크로피펫 사용설명서 + 달달한 꿀팁 첨가!
[사용 설명서] 마이크로피펫 사용설명서 + 달달한 꿀팁 첨가!

주제에 대한 기사 평가 마이크로 피펫 구조

  • Author: 대학원생인 것
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  • Date Published: 2020. 10. 22.
  • Video Url link: https://www.youtube.com/watch?v=uNzQqCW7ZH8

마이크로피펫 사용법

이번편에서는 저희 사이트의 주력 상품인 마이크로피펫에 대해 알아보려 합니다.!

1. 마이크로피펫(micropipette)이란?

마이크로미터(uL) 단위의 적은 양의 액체를 정확하게 흡입, 분주 하는 기구입니다.

옮길 수 있는 양의 범위에 따라 여러 종류가 있습니다.

보통의 실험실에서는 (0.2 ~ 2uL), (2 ~ 20uL), (20 ~ 200uL), (100 ~ 1000uL)의

4종류를 갖추고 있습니다.

2. 마이크로피펫의 구조

1) Plunger buutton: 액체를 취하거나 옮길 때 누르는 버튼으로 상단에 옮길 수 있는 용량 범위가 적혀 있음.

2) Tip ejector button : 마이크로 피펫을 사용 후 Tip을 제거할 때 눌러주는 버튼

3) Digital volume indicator : 마이크로피펫으로 옮길 부피 용량이 표시되는 부분

4) Volume adjustment knob : 회전 시, Digital volume indicator의 숫자를 변경할 수 있음. 즉, 마이크로피펫으로 옮길 부피 용량을 조절하는 역할을 함. 사용시 용량 범위 안에서만 조절 가능.

5) Tip : 액체를 옮기기 위해 마이크로피펫 끝에 장착하는 기구임. 사용하는 마이크로피펫의 종류에 따라 서로 다른 종류의 Tip을 사용해야함. 0.2-2uL, 2-20uL, 20-200uL, 100-1000uL 팁을 사용

3. 마이크로피펫의 사용방법

1) Foward Pipetting : 액체를 옮길 때 가장 기본적으로 사용하는 방법입니다.

Plunger button을 누르지 않았을 때가 기본 상태이며, Plunger Button을 누를 때 2개의 정지지점이 있는데 이를 가각

1st stop, 2nd stop이라 합니다.

1st stop, 2nd stop이라 합니다. 용액을 취할 때 : 1st stop까지 누른 후 채취할 용액에 피펫팁을 담그고 기본상태까지 천천히 올리면 됩니다.

용액을 옮길 때 : 용기의 벽면을 따라 2nd stop까지 버튼을 눌러 용액을 빼냅니다. 사용 후에는 Tip ejector button을 눌러 Tip을 제거 합니다.

2) Reverse pipetting : 점성이 높은 액체, 거품이 생기는 액체, 매우 소량의 액체 분배 시 사용하는 방법입니다.

용액을 취할 때 : 2nd stop까지 누른 후 채취할 용액에 피펫팁을 담그고 기본상태까지 천천히 올립니다.

용액을 옮길 때 : 옮길 용기의 벽면을 따라 1st stop까지 plunger button을 눌러 용액을 빼냅니다. 사용 후에는 Tip ejector button을 눌러 Tip을 제거 합니다.

4. 마이크로피펫의 용량 세팅 방법

마이크로피펫의 Volume adjustment konb를 회전시키면 Digital volume indicator의 숫자가 변하면서 옮길 부피가 정확히 조절됩니다.

1) 마이크로피펫으로 옮길 수 있는 부피 범위

➢ 아래 그림과 같이 Plunger button에 적혀있는 숫자를 참고합니다.

2) 부피 읽는 방법 : Digital volume indicator에는 3개의 숫자가 적혀 있으며, 첫자리는 옮길 수 있는 최대 부피의 첫자리와 동일합니다. 예를 들어 옮길 수 있는 최대 부피가 1000인 경우 첫자리는 천의자리, 옮길 수 있는 최대 부피가 200인 경우 첫자리는 백의 자리입니다.

5. 마이크로피펫의 사용 시 유의점

1) 마이크로피펫으로 옮길 수 있는 용령 범위 밖으로 숫자 눈금을 돌리지 않습니다.

2) 용액이 담긴 상태에서 마이크로피펫을 거꾸로 들지 않습니다.

3) 피펫팅은 눈앞에서 하는 것을 원칙으로 합니다.

3) 마이크로페핏을 모두 사용한 후에는 옮길 수 있는 부피용량에서 최대 용량이 되도록 숫자 눈금을 돌려 놓습니다.

6. 추천 마이크로피펫

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[특허]마이크로 피펫

본 발명은, 내부에 샘플용액이 흡입 또는 분주되는 실린더부를 형성하는 몸체와, 몸체 내부에 삽입되어 실린더부를 따라 상하방향으로 슬라이딩 이동하는 피스톤과, 피스톤과 연결되고 사용자에 의하여 피스톤을 하방향으로 이동시키는 피스톤로드를 포함하는 피펫본체, 피스톤로드와 결합되어 하방향으로 이동된 피스톤로드를 상방향으로 이동시키는 복원스프링 및 피펫본체와 연결되어 복원스프링에 의한 피스톤로드의 상방향 이동속도를 감쇠하는 일방향 감쇠기구를 포함하는 마이크로 피펫을 제공한다. 따라서, 샘플용액 흡입시 에어로졸 현상을 방지하여 마이크로 피펫의 오염을 방지할 수 있으며, 경제적이다.

본 발명은, 내부에 샘플용액이 흡입 또는 분주되는 실린더부를 형성하는 몸체와, 몸체 내부에 삽입되어 실린더부를 따라 상하방향으로 슬라이딩 이동하는 피스톤과, 피스톤과 연결되고 사용자에 의하여 피스톤을 하방향으로 이동시키는 피스톤로드를 포함하는 피펫본체, 피스톤로드와 결합되어 하방향으로 이동된 피스톤로드를 상방향으로 이동시키는 복원스프링 및 피펫본체와 연결되어 복원스프링에 의한 피스톤로드의 상방향 이동속도를 감쇠하는 일방향 감쇠기구를 포함하는 마이크로 피펫을 제공한다. 따라서, 샘플용액 흡입시 에어로졸 현상을 방지하여 마이크로 피펫의 오염을 방지할 수 있으며, 경제적이다.

대표

청구항

내부에 샘플용액을 수용하는 실린더부와 상기 샘플용액이 흡입 또는 분주되는 피펫팁이 형성된 몸체와, 상기 몸체 내부에 구비되어 상기 실린더부를 따라 상하방향으로 슬라이딩 이동하는 피스톤과, 상기 피스톤과 연결되고 사용자에 의하여 상기 피스톤을 이동시키며, 일측에 랙기어가 구비된 피스톤로드를 포함하는 피펫본체;상기 피스톤로드와 결합되어 상기 하방향으로 이동된 상기 피스톤로드를 상방향으로 이동시키는 복원스프링; 및상기 피펫본체와 연결되어 상기 복원스프링에 의한 상기 피스톤로드의 상방향 이동속도를 감쇠하는 일방향 감쇠기구를 포함하고,상기 일방향 감쇠기구는, 상기 랙기어와 맞물려 상기 피스톤로드의 상승 시에만 회전하는 일방향 회전베어링과, 상기 일방향 회전베어링과 결합하여 회전하고, 일정 질량을 가지고 있어 상기 일방향 회전베어링의 초기 회전 시 관성모멘트에 의하여 상기 일방향 회전베어링의 회전력을 감쇠하여 상기 피스톤로드의 상기 상방향 이동속도를 완화하는 제1관성수단을 포함하는 마이크로 피펫.

내부에 샘플용액을 수용하는 실린더부와 상기 샘플용액이 흡입 또는 분주되는 피펫팁이 형성된 몸체와, 상기 몸체 내부에 구비되어 상기 실린더부를 따라 상하방향으로 슬라이딩 이동하는 피스톤과, 상기 피스톤과 연결되고 사용자에 의하여 상기 피스톤을 이동시키며, 일측에 랙기어가 구비된 피스톤로드를 포함하는 피펫본체;상기 피스톤로드와 결합되어 상기 하방향으로 이동된 상기 피스톤로드를 상방향으로 이동시키는 복원스프링; 및상기 피펫본체와 연결되어 상기 복원스프링에 의한 상기 피스톤로드의 상방향 이동속도를 감쇠하는 일방향 감쇠기구를 포함하고,상기 일방향 감쇠기구는, 상기 랙기어와 맞물려 상기 피스톤로드의 상승 시에만 회전하는 일방향 회전베어링과, 상기 일방향 회전베어링과 결합하여 회전하고, 일정 질량을 가지고 있어 상기 일방향 회전베어링의 초기 회전 시 관성모멘트에 의하여 상기 일방향 회전베어링의 회전력을 감쇠하여 상기 피스톤로드의 상기 상방향 이동속도를 완화하는 제1관성수단을 포함하는 마이크로 피펫.

[후배에게 주고 싶은 면역학 연구 노트] #7_파이펫 사용법

이번 연재 내용은 면역학에 제한되는 내용들은 아니지만 연재 취지에 걸맞게 후배들에게 너무나도 전해주고 싶은 실험기법이기에 연재에 포함하기로 했습니다. 바로 실험에 있어서 필수적인 도구인 파이펫(Pipette)에 대한 사용법을 다루고자 합니다. 파이펫을 사용하는 올바른 방법에 대해 큰 고민 없이 파이펫을 사용하는 연구자들을 주변에서 자주 보게 됩니다. 사실 실험실에서 제대로 배울 기회가 없었기 때문일 것입니다. 따라서 이번 연재를 통해 파이펫을 사용하는 방법들에 대해 소개하도록 하겠습니다. 1. 들어가는 글 젓가락질을 잘해야 밥을 잘 먹는 것은 아니죠. 그런데 연구자들에게 젓가락에 해당한다고 할 수 있는 파이펫은 어떨까요? 파이펫 사용이 조금 서툴러도 실험은 됩니다. 다만 한두 번 해도 될 실험을 세네 번 혹은 그 이상 해야하는 경우가 생깁니다. 또한 96-well plate와 같이 Well의 부피가 작은 Culture plate에서 면역세포를 분화시킬 경우 전체 부피가 매우 작기 때문에 파이펫에 의해 발생하는 부피의 오차가 전체 부피에서 차지하는 비중이 큽니다. 이런 이유로 올바른 파이페팅을 통해 정확한 부피를 분주하는 것이 일관성 있는 실험결과를 얻는데 큰 기여를 합니다. 제가 처음 파이펫을 잡았을 때 파이펫의 원리에 대한 깊은 이해없이 파이펫을 사용했었습니다. 그러다 실험실에 계시던 박사님께서 제 파이페팅에 문제가 있는 것을 보시고 파이펫을 사용하는 방법에 대해 알려주셨고, 이후로 파이펫 사용법에 대해 더 공부하면서 제대로 파이펫을 사용할 수 있게 되었습니다. 사실 그전까지는 제가 파이페팅을 잘못하고 있는줄도 몰랐던 것이죠. 파이페팅에서 어떤 문제들이 발생하는지와 해결방법들을 이 글을 통해 소개해 보고자합니다. 2. 파이펫의 종류 본론으로 들어가기 앞서 제가 이 글에서 다루고자하는 파이펫이 어떤 것인지를 명확히 하고자합니다. 왜냐하면 파이펫은 종류가 다양하기 때문입니다. 아마 파이펫이라고 하면 다들 가장 먼저 떠오르는 ‘그것’이 있을 것이고, 저 역시도 ‘그것’에 대해 얘기하고자 합니다. 바로 공기 치환 방식의 파이펫입니다. 정확한 명칭을 통해 파이펫의 종류를 크게 세 가지만 간단히 짚어보도록 하겠습니다 (그림 1).

1) 공기 치환 방식 파이펫 (Air displacement pipette): 파이펫이라고 하면 대부분 팁을 끝에 꽂아 사용하는 파이펫을 먼저 떠올릴 것입니다. 사용 빈도가 가장 높기 때문이겠죠? 바로 ‘그 파이펫’의 명칭은 Air displacement pipette (공기 치환 파이펫)입니다. 파이펫 안에 있는 피스톤에 의해 생기는 에어쿠션(Air cushion)이 만들어내는 부피의 차이를 이용해 시료를 빨아올리거나 분주하는 방식을 채택한 파이펫입니다. 파이펫 내부의 피스톤과 시료 사이에 항상 에어쿠션이 존재하며, 에어쿠션은 수축/팽창에 취약하기 때문에 정량한 시료의 부피에 오차가 생길 수 있다는 단점이 존재합니다. 하지만 아주 세세한 부피를 설정할 수 있고 사용되는 팁이 다른 파이펫들에 비해 저렴하다는 장점이 존재합니다. 2) 직접 치환 방식 파이펫 (Positive displacement pipette): Dispenser (또는 Repeater) 끝에 부착하여 사용하는 주사기 형태의 파이펫입니다. 피스톤과 시료 간에 직접적인 접촉이 있고 그 사이에 에어쿠션이 존재하지 않습니다. 에어쿠션을 사용하지 않기 때문에 보다 정확하고 일정한 부피의 시료를 빨아들이고 배출할 수 있으며, 디스펜서의 설정값에 따라 여러 회에 걸쳐 동일한 양의 시료를 반복적으로 배출해낼 수 있는 장점이 있습니다. 다만 공기 치환 방식 파이펫에서 사용하는 팁에 비해 가격이 비싸기 때문에 공기 치환 방식 파이펫보다는 제한적으로 사용합니다. 3) Serological pipette: 앞서 소개한 파이펫들은 본체를 이용해 부피를 설정하고 팁이나 피스톤을 이용해 시료를 빨아들인 것과 다르게 Serological pipette은 파이펫 자체에 부피를 표시하는 눈금이 그려져 있는 원통형의 긴 플라스틱 관입니다. 별도의 파이펫에이드(Pipette-Aid)를 활용해 원하는 만큼 시료를 빨아들이고 배출할 수 있고 그 속도도 조절할 수 있습니다. 파이펫에 표시된 눈금에 의존해 부피를 가늠해야하기 때문에 시료의 부피가 정확하지는 않지만 한 번에 많은 양의 시료를 옮길 수 있는 장점이 있어서 어느 정도의 오차가 허용되는 경우에 주로 사용됩니다. 우리에게 아주 익숙한 공기 치환 방식의 파이펫(이하 파이펫)은 시료를 옮기는 데 사용되는 팁이 상대적으로 저렴하고 시료의 부피를 아주 작은 단위까지 정밀하게 설정할 수 있기 때문에 가장 널리 사용됩니다. 하지만 앞서 설명한대로 시료를 옮기는데 필요한 매개체로 에어쿠션을 사용하기 때문에 이로 인해 다양한 문제점들이 발생하게 됩니다. 파이펫의 작동 원리와 에어쿠션에 의해 생길 수 있는 문제점들을 소개하고 이를 해결할 수 있는 바른 파이펫 사용법을 소개하도록 하겠습니다. 3. 시료의 점성(Viscosity)이 파이페팅에 미치는 영향: Forward pipetting vs Reverse pipetting 공기 치환 방식의 파이펫에 의해 발생하는 부피의 오차는 많은 경우 액체가 갖는 점성때문에 발생합니다. 안타깝게도 이 부분을 고려하지 않고 파이페팅하는 경우를 주변에서 많이 보게 됩니다. 실험실에서 사용하는 Cell culture media의 경우 FBS를 넣기 때문에 점성이 생깁니다. 이 뿐 아니라 단백질이 들어간 시료들은 대게 점성이 생기기 마련입니다. 글리세롤이나 Tween-20와 같이 액체 자체가 점성이 높은 경우도 있습니다. 이런 점성이 높은 시료들을 파이페팅하는 경우에는 시료의 일부가 파이펫 팁 안에 남게 되고, 이로 인해 부피의 오차가 발생합니다 (그림 2).

파이펫에서 설정하는 부피만큼 시료를 빨아들이고 배출하는 과정에는 ‘처음 빨아들인 부피가 실험자가 설정한 부피다’라는 전제가 깔려있습니다. 따라서 빨아들인 시료를 전부 배출했을 때 설정한 부피의 시료를 옮기게 되는 것입니다. 하지만 점성이 큰 시료들의 경우 아무리 열심히 파이펫의 푸쉬버튼을 눌러도 파이펫 팁 안에 남는 시료를 완벽하게 배출해낼 수 없습니다. 왜냐하면 시료의 일부가 팁 내벽을 타고 천천히 흐르고 팁 끝 내벽에 시료가 맺히기 때문입니다. 이 과정에서 미처 배출되지 않고 팁 내벽에 남은 시료의 부피만큼 에어쿠션이 시료대신 배출되고, 이후에 재차 푸쉬버튼을 누르면 거품만 더 만들어질 뿐 팁 내부에 남은 시료를 완벽하게 다 배출하는 것이 불가능합니다. 내벽을 타고 천천히 흐르는 시료가 팁 말단에 도착할 때까지 기다렸다가 배출하여도 일부는 여전히 팁 내부에 남게 됩니다. 결국 점성이 높은 시료를 파이페팅하게 될 경우 의도한 것보다 적은 부피의 시료와 함께 공기방울이 배출되게 됩니다.

이런 문제점을 해결할 수 있는 파이페팅 방법이 있는데 이를 Reverse pipetting이라고 합니다 (그림 4). 이와는 반대 개념인 Forward pipetting이라 하면 푸쉬버튼을 두 번째 정지지점까지 눌러서 처음 빨아들인 시료를 완벽하게 배출하는 방식을 의미합니다 (그림 3). 반면 Reverse pipetting은 간단하게 말해서 ‘필요한 것보다 많은 양의 시료를 빨아들인 후 원하는 만큼만 배출’하는 방식을 의미합니다. 다르게 말하면 ‘내가 설정한 시료의 부피는 처음 빨아들인 부피가 아니라 배출되는 부피와 같다’는 전제를 하는 것입니다. 처음 시료를 빨아들일 때는 푸쉬버튼을 두 번째 정지지점까지 누른 상태에서 빨아들이고, 이후에 배출할 때는 첫 번째 정지지점까지 누름으로써 시료의 점성과 상관없이 에어쿠션의 부피만큼에 해당하는 시료가 배출되게 됩니다 (그림 4). 팁 내부에 시료의 양이 필요 이상으로 존재하기 때문에 시료를 배출하여도 여전히 팁 내부에 일정량의 시료가 남아있음으로 인해 에어쿠션이 새어나가지 않고 해당 부피만큼 시료가 배출되는 것입니다. 따라서 점성이 있는 시료는 Reverse pipetting 방법을 사용해야 오차를 줄일 수 있습니다.

하지만 Reverse pipetting의 경우 처음에 시료를 빨아들일 때 필요이상으로 빨아들이기 때문에 준비된 시료의 양이 적을 때 문제가 될 수도 있습니다. 또한 빨아들여야 하는 부피가 큰 경우 자칫 파이펫 본체가 시료에 의해 오염될 수도 있습니다. 이런 부분 때문에 저는 Reverse pipetting의 원리는 따르지만 이를 조금 다르게 변형해서 파이페팅합니다 (그림 5). 시료를 취하기 이전에 팁을 시료에 담근 상태에서 3~4회 파이페팅을 천천히 해주면서 (Pre-wetting) 공기방울이 배출되고 팁 내부에 일정한 양의 시료가 코팅되어 쌓이도록 해준 뒤 시료를 빨아들이는 것입니다. 결국 Reverse pipetting의 경우와 마찬가지로 팁 안에는 실험자가 설정한 부피보다 많은 양의 시료가 들어있는 상태가 되므로 이후 시료를 배출할 때 에어쿠션의 손실 없이 설정한 부피만큼 시료가 배출되게 됩니다. 다만 팁 안에 잔류하는 시료의 양에서 차이가 날 뿐입니다. Cell culture plate의 각 Well에 동일한 시료를 분주하는 경우 Media의 점성 때문에 완벽한 Forward pipetting이 불가능하며, 이런 이유로 시료를 분주할 때마다 팁을 교체하는 연구원을 종종 봅니다. 하지만 Forward pipetting으로는 결코 정확한 부피의 Media를 분주하지 못합니다. 앞에 설명한대로 의도한 것보다 적은 양이 배출될 뿐 아니라 매번 생기는 부피의 손실이 다릅니다. 각 Well마다 결국 부피의 오차가 생기게 됩니다. 저의 경우 CD4 T cell을 주로 키우는데 거의 늘 96-well plate를 사용합니다. Well 하나에 들어가는 Media의 최종 부피는 200 μl이고 이를 4등분하여 첫 번째 50 μl에는 α-CD3 antibody와 α-CD28 antibody, 두 번째 50 μl에는 분화에 필요한 Cytokine, 세 번째 50 μl에 세포, 나머지 50 μl에는 가끔 추가되는 Compound, inhibitor 등등을 넣어 각각을 독립적으로 분주합니다. 공통적으로 사용되는 것들이 있는 반면 그렇지 않은 것들도 있기 때문에 이런 전략을 사용합니다. 결과적으로 한 Well에 네 번 50 μl의 Media를 넣는 것이 되는데, 파이페팅 간에 오차가 크다면 오차가 누적되어 결국 큰 오차를 만들어낼 것입니다. 따라서 Reverse pipetting을 통해 정확한 부피를 분주해야 오차가 줄고 일관성 있는 데이터를 얻을 수 있습니다. qPCR과 같이 동일한 조성을 가진 Mixture를 만든 후 튜브에 동일한 양을 분주하는 경우에도 Reverse pipetting을 통해 분주해야 모든 튜브에 같은 양의 Mixture가 들어가게 됩니다. 세포를 키운 Culture supernatant를 이용한 ELISA의 경우도 마찬가지입니다. 결국 물이나 PBS 같이 점성이 없는 경우는 Forward pipetting, 그 외 대부분의 경우는 점성이 있는 경우이기 때문에 많은 경우 Reverse pipetting 방법을 사용해야 동일한 부피를 일관되게 분주할 수 있습니다. 직접 치환 방식의 파이펫은 에어쿠션 없이 시료와 피스톤이 직접 접촉하므로 점성에 상관 없이 정확한 부피를 옮길 수 있으므로 경우에 따라 직접 치환 방식 파이펫을 이용하는 것도 가능합니다. 4. 파이펫 팁이 닿는 위치와 파이페팅 속도가 미치는 영향

파이펫을 통해 시료를 옮기는 과정에서 팁이 어디에 닿느냐에 따라 부피의 오차가 발생하는 경우가 많습니다 (그림 6).

1) 시료를 빨아들이고 팁을 뗄 때

점성이 높은 시료를 빨아들인 후 팁을 시료에서 제거할 때 팁의 외벽에 시료가 묻어나오게 됩니다. 이렇게 묻어나오는 시료는 파이펫에 의해 설정된 부피에서 고려되지 않은 부분입니다. 따라서 가장 좋은 방법은 팁을 시료에 아주 살짝만 담가 팁 외벽에 묻는 시료를 최소화시키는 것입니다. 하지만 늘 일관성 있게 아주 살짝 팁을 담그는 것이 쉽지만은 않습니다. 그리고 하나의 팁을 여러번 사용하면 팁 외벽에 묻는 시료가 누적되어 양이 늘어납니다. 그래서 시료를 빨아들이고 팁을 시료에서 제거할 때는 시료가 담겨있던 튜브나 플레이트의 벽에 팁을 살짝 갖다 대어줌으로써 팁 외벽에 묻은 시료를 팁으로부터 제거해주는 것이 오차를 줄일 수 있는 방법입니다. 2) 시료를 배출 할 때

점성이 높은 시료는 앞에서 Reverse pipetting방식으로 시료를 배출해야 정확한 부피의 시료를 배출할 수 있다는 설명을 했습니다. 하지만 시료를 배출할 때 마지막에 나오는 시료가 팁 외벽을 타고 방울을 형성하면서 팁 끝에 맺히게 됩니다. Reverse pipetting에서는 배출되는 시료의 부피가 설정한 부피이므로 팁 끝에 맺힌 방울까지 옮겨져야합니다. 따라서 시료를 배출할 때는 튜브나 플레이의 벽에 팁을 접촉시킨 상태에서 배출해야 합니다. 이렇게 해줄 때 마지막에 나오는 시료가 팁 끝에 맺히지 않고 튜브나 플레이트의 벽을 타고서 흘러 내려가게 됩니다. 3) 파이페팅 속도

시료를 빨아올릴 때 푸쉬버튼을 너무 빠르게 놓아버리거나 팁을 시료에서 너무 빨리 떼는 것도 부피의 오차가 생기는 원인이 됩니다. 시료를 빨아올릴 때는 푸쉬버튼을 천천히 놓아주고 시료가 완벽히 흡입될 때까지 기다려야합니다. 푸쉬버튼을 너무 빨리 놓아버리면 시료가 팁 안에서 튀면서 팁 내벽이나 파이펫에 묻을 수도 있고, 시료가 팁 안으로 미처 다 빨리기 이전에 팁을 시료에서 떼어내면 시료대신 공기가 들어가면서 부피에 오차가 생기기 때문입니다. 특히 점성이 강할 수록 팁 안으로 시료가 유입되는 데 걸리는 시간이 깁니다. 시료를 배출하는 경우에도 점성이 강한 시료는 천천히 배출되기 때문에 팁 안에 있는 시료가 완전히 배출될 때까지 충분히 기다려야 합니다. 너무 서둘러 시료를 배출하면 시료가 적게 배출되고 배출되지 않은 양이 팁 내부에 누적되게 됩니다. 5. 파이펫의 각도와 팁이 잠기는 깊이가 미치는 영향 시료를 빨아들일 때 파이펫의 각도를 가능하면 수직으로 유지하는 것이 오차를 줄이는 방법입니다. 파이펫의 각도가 기울어질 때의 문제점은 바로 팁 내부 시료에 의해 생기는 정수압(Hydrostatic pressure)이 감소한다는 것입니다. 이로 인해 더 많은 시료가 팁 안으로 유입되게 됩니다. 파이펫의 각도가 30도 이상 기울어질 경우 오차가 크게 증가합니다.

파이펫 팁이 시료에 잠기는 깊이도 중요합니다. 팁을 너무 깊게 담글 경우 팁 외벽에 시료가 묻게 되는 오차도 발생하지만, 팁이 깊게 담길 수록 더 강한 정수압의 영향을 받아 더 많은 양의 시료가 팁 내부로 들어가게 됩니다. 보통의 경우 2~4 mm 정도 깊이로 팁을 담그고 부피가 1 μl 미만이라면 1 mm 정도 깊이로 팁을 담그는 것이 이상적입다. 6. 액체의 휘발성이 파이페팅에 미치는 영향 파이펫으로 에탄올이나 클로로포름과 같이 휘발성이 큰 액체를 옮기는 경우 팁에서 시료가 나와서 떨어지는 경험을 해 본적이 있을 것입니다. 왜 이런 일이 발생할까요? 휘발성이 강한 액체들이 기화하면서 에어쿠션의 부피를 증가시키고, 부피가 증가된 에어쿠션이 시료를 밀어내기 때문입니다 (그림 7).

모든 액체는 각기 고유의 증기압을 갖습니다. 증기압이란 기화와 액화의 속도가 서로 평형상태에 도달해서 겉으로 보기엔 아무런 상의 변화가 없는 상태에서의 기압을 의미합니다. 에탄올이나 클로로포름과 같은 휘발성이 강한 액체의 증기압은 대기압보다 높기 때문에 이런 액체의 기화는 상대적으로 매우 빠르게 일어납니다. 이러한 성질 때문에 시료를 덜기 전에 팁을 시료에 담근 상태로 시료를 빨아들이고 배출하는 것을 여러 회 반복하는 Pre-wetting 과정이 필요합니다. Pre-wetting과정을 통해 에어쿠션의 압력이 액체의 증기압에 도달하도록 해주면 액체의 기화에 따른 부피증가를 막을 수 있고, 결과적으로 시료가 팁 밖으로 배출되는 현상을 막을 수 있습니다. 또한 Reverse pipetting을 통해 팁 내부에 액체가 일정량 잔존하도록 해야 에어쿠션의 압력이 해당 액체의 증기압으로 유지되어 반복적인 파이페팅을 할 수 있습니다. 물론 에어쿠션의 압력이 완벽하게 해당 액체의 증기압까지 도달하는 것은 액체 종류에 따라 시간이 조금 걸릴 수도 있습니다. 그나마 다행인 것은 휘발성이 강한 유기용매 등을 이용할 때는 부피의 오차가 조금 생겨도 되는 경우가 많다는 점입니다. 만약 정확한 정량이 요구된다면 직접 치환 방식 파이펫을 이용하는 것을 추천드립니다. 7. 온도가 미치는 영향 파이펫을 작동시키는 힘이 에어쿠션인 관계로 온도도 파이페팅에 영향을 미칩니다. 예를 들어 -20℃에 보관된 Restriction enzyme을 파이펫으로 옮기는 경우 Enzyme으로부터 팁을 떼는 순간부터 팁 안에 있던 Enzyme이 팁 밖으로 천천히 흘러나옵니다. Restriction enzyme을 빨아올리는 동안 파이펫 내부의 에어쿠션이 낮은 온도로 인해 수축했다가 파이펫이 상온에 노출되면서 에어쿠션의 온도가 다시 올라가고 에어쿠션이 팽창하게 되어 Enzyme이 밀려나오는 것입니다. 같은 원리로 푸쉬버튼 조작 없이 팁만 Restriction enzyme에 갖다 대도 에어쿠션이 수축하면서 Restriction enzyme이 팁 내부로 빨려 올라갑니다. 물론 모세관현상도 영향이 있으나 온도 변화로 인한 에어쿠션의 수축이 큰 영향을 줍니다. 결국 예시의 상황처럼 매우 낮은 온도에 보관된 시약을 파이펫으로 빨아올릴 때는 의도한 것보다 조금 더 많은 양을 얻게 되는 결과가 야기됩니다. 다행히도 Restriction enzyme을 사용할 때 조금 더 쓴다고 큰 문제는 되지 않습니다. 다만 Enzyme을 파이펫으로 빨아올린 상태에서 자칫 잘못하면 Enzyme이 팁 밖으로 나와 떨어질 수도 있으니 재빨리 옮겨야 Enzyme을 아껴 쓸 수 있습니다. 이와 같은 현상은 Agarose gel을 만들 때도 볼 수 있습니다. Agarose를 플라스크에 녹인상태에서 EtBr(또는 기타 DNA 염색 시약)을 넣을 때 푸쉬버튼을 누르지 않아도 팁 안에서 EtBr이 자동적으로 나와 떨어집니다. 플라스크 내부 열기가 파이펫의 에어쿠션을 팽창시키기 때문입니다. 이처럼 파이펫은 온도에도 민감합니다. 8. 팁 안으로 거품이 차오르는 현상에 대한 이해와 해결 방법 Media나 BSA가 들어간 PBS 등을 파이페팅하다보면 팁 안에 거품이 생기고, 거품이 점점 위로 올라가는 경험을 해본적이 있을 것입니다. 점성이 있는 시료를 파이페팅할 때 이런 현상이 생기는데, 그 이유는 앞서 설명했듯이 점성이 있는 시료는 팁 밖으로 완전히 배출되지 않고 팁 안에 남기 때문입니다. 팁 내부에 남은 시료는 팁 말단에 쌓여 얇은 막을 생성하게 되고 이후 공기가 팁 안으로 역행하면서 거품이 생기게 됩니다. 공기가 파이펫으로 역행하는 경우는 두 가지 경우가 있습니다. 파이펫의 푸쉬버튼을 두 번째 정지지점까지 밀어주었다가 첫 번째 정지지점으로 복원하는 과정과 푸쉬버튼을 완전히 놓게 되어 푸쉬버튼이 기본 위치로 복원되는 과정입니다. 따라서 점성이 있는 시료를 파이페팅하는 경우에는 1) Reverse pipetting을 통해 푸쉬버튼을 첫 번째 정지지점까지만 밀고 2) 푸쉬버튼을 놓지 않은 상태에서 재차 시료를 빨아올려야 거품이 만들어지는 것을 방지할 수 있습니다. 즉 팁 내부로 공기가 역행하여 들어오는 것을 막아야 거품 생성을 막을 수 있습니다. 9. 감염성 시료를 취급할 때 유의사항: 에어로졸 형성

거의 모든 액체로부터 에어로졸이 형성될 수 있습니다. 파이페팅을 하는 과정에서도 에어로졸의 형성은 가능합니다. 실험실의 생물안전등급(Biosafety level)에 따라 취급하는 바이러스나 박테리아 종류가 다르지만 비교적 안전한 바이러스라고해서 다른 시료로 교차감염되는 것은 누구도 원하지 않습니다. 바이러스나 박테리아를 취급할 때 파이펫 팁 내부에 에어로졸이 발생하면 파이펫의 에어쿠션으로 에어로졸이 번지고 다른 시료로 에어로졸이 유입되어 교차감염이 일어날 수 있습니다. 또한 위험한 바이러스나 박테리아라면 실험자에게 감염을 일으킬 위험도 발생합니다.

이와 같이 파이페팅 과정 중에 에어로졸 형성이 교차감염을 일으킬 수 있으므로 감염성 시료를 취급할 때는 에어로졸을 차단할 수 있는 필터팁을 이용하는 것이 안전한 방법입니다. 또한 감염성은 아니지만 RNA와 같이 다른 오염물질이 유입되어서는 안 되는 시료를 다룰 때도 필터팁을 이용해서 파이펫 내부의 에어쿠션을 통해 오염물질이 유입되는 것을 차단하는 것이 중요합니다. 비슷한 이유로 Serological pipette의 끝에도 필터가 부착되어 있습니다. 물론 Serological pipette 끝의 필터는 에어로졸 뿐 아니라 액체 상태의 시료가 파이펫에이드 내부로 유입되는 것을 차단하는 중요한 기능도 합니다. 10. 아주 적은 양의 시료(예를 들어 Cytokine)를 파이페팅할 경우 항체나 Restriction enzyme과 같은 시약들을 사용하는 경우 필요한 양이 보통 매우 적습니다. 그런데 사실 이런 시약들의 경우 조금 더 들어가거나 덜 들어가도 큰 문제는 없습니다. 하지만 세포 실험을 하는 경우에는 이야기가 달라집니다. Inhibitor라든지 면역세포에 처리하는 Cytokine 같은 경우 매우 적은 양을 필요로 할 때가 많고 그 양도 가능한 정확해야합니다. 이런 경우에도 점성이 있다면 원칙적으로는 Reverse pipetting 방법을 사용하는 것이 맞겠지만, 시료의 부피가 1 μl 또는 그 이하로 매우 작은 경우 Reverse pipetting 방법으로 시료가 잘 배출되지 않습니다. 에어쿠션의 부피 변화가 너무 작다보니 시료를 충분히 밀어내지 못하는 것이 원인입니다. 또한 적은 양의 시료를 배출할 때는 보통 이를 희석하는 경우가 많습니다. 예를 들어 1000X 고농도 Cytokine stock을 Cell culture media 1 ml에 넣어 희석하는 경우 팁을 Media에 담근상태로 1 μl의 Cytokine을 배출해야 하는데, 모세관현상 때문에 오히려 Media가 팁 내부로 유입되는 경우가 발생해서 Reverse pipetting으로는 적은양의 시료를 배출하는 데 문제가 생깁니다. 게다가 Reverse pipetting은 필요한 양보다 더 많은 양의 시료를 소비하게 되는데 이렇게 적게 필요한 시약들은 대부분 가격이 비싸다보니 Reverse pipetting으로 시료를 낭비하는 것이 합리적이지는 않습니다. 이런 이유로 아주 적은 부피의 시료를 파이페팅할 때는 예외적으로 Forward pipetting 방법을 권합니다. 11. 파이펫과 팁의 결속 Multichannel pipette은 한 번에 여러 팁을 꽂아 여러 Well에 같은 양의 시료를 분주할 수 있기 때문에 ELISA를 한다든지 96-well plate에 세포를 키운다든지 하는 경우에 주로 사용됩니다. 하지만 Multichannel pipette을 이용할 때는 모든 팁이 파이펫에 제대로 결속되도록 하는 것이 매우 중요합니다. 팁이 파이펫에 꽉 맞물리지 않고 틈이 발생하면 그 사이로 에어쿠션이 손실되어 정확한 부피의 시료를 옮길 수 없습니다.

파이펫 자체에는 문제가 없다는 전제하에 팁이 제대로 꽂히지 않는 경우는 보통 1) 팁이 꽂혀있는 랙이 평평하지 않거나 2) 파이펫 채널 중 일부가 랙과 닿아 팁과 파이펫의 결속을 방해하는 경우입니다 (그림 8). 따라서 Multichannel pipette을 사용할 때는 모든 채널이 랙 내부에 위치하도록 사용하는 것이 좋고, 채널 개수보다 적은 팁이 필요하다면 랙 내부에서 팁을 재배열하면 됩니다.

12. 마치는 글

이번 글에서는 파이펫이 작동되는 원리 및 이로 인해 발생되는 문제점들과 해결방법들을 소개했습니다. 생각보다 파이펫의 원리에 대한 고민 없이 파이펫을 사용하는 분들이 정말 많습니다. 저 역시도 그랬었고요. 그래서 이번 글이 이제 막 연구를 시작하는 분들께는 정말 큰 도움이 될 것 같습니다. 혹시 파이페팅을 잘못하고 계셨다면 이번 글을 통해 정확한 파이페팅을 익히고 일관성 있는 데이터를 얻기를 바라며 글을 마치겠습니다. References

Suominen, Irmgard, and Sami Koivisto. “Increasing precision when pipetting protein samples: Assessing reliability of the reverse pipetting technique.” American Laboratory 43.2 (2011): 50. Ewald, Kornelia, and A. G. Eppendorf. “Impact of pipetting techniques on precision and accuracy.” Eppendorf Userguide 20 (2015): 1-4.

It’s better than Sinder!

04:59 It’s better than Sinder!

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마이크로 피펫

피펫(영어: pipette) 또는 스포이트(←네덜란드어: spuit ‘바늘’[*] )는 작은 양의 액체를 옮기는 데에 쓰는 실험 도구로, 자연과학 실험에 사용되는 실험 기구 중 하나이다. 또한 액체나 기체의 부피를 정밀하게 측정할 수 있다. 눈금 피펫과 홀 피펫, 마이크로 피펫 등이 있다. 정밀한 양을 옮기기 위해 고안된 기구이므로 100mL 정도의 용액을 옮기기엔 적합하지 않다. 100mL 정도면 피펫이 아니라 플라스크를 이용한다.

종류 [ 편집 ]

파스퇴르 피펫

한국어권에서는 보통 고무주머니가 달려 있거나 전체가 플라스틱으로 된 것 등을 ‘스포이트’라고 부르고, 실험용으로 쓰는 것을 ‘피펫’이라 부른다. 눈금 피펫은 정해진 범위 안에서 원하는 부피를 자유롭게 취할 수 있지만 정밀도는 홀 피펫에 비해 떨어지는 단점이 있다. 홀 피펫은 10mL 또는 20mL 등 일정량의 액체를 취할 때 사용한다. 대신 그 외의 부피는 취하지 못한다. 눈금이 없기 때문이다. 그밖에 점적 피펫이나 가스 피펫도 있지만 특별한 실험이 아니면 안 쓴다. 이렇듯 피펫에도 종류는 많지만 실제 실험실에서는 마이크로 피펫만 쓰는데, 마이크로 피펫이 눈금 피펫과 홀 피펫의 장점을 모두 갖고 있기 때문이다. 물론 그만큼 가격이 훨씬 비싼 게 단점이다.

사용법 [ 편집 ]

피펫으로 액체를 취할 때는 필러를 사용하도록 하고 입으로 빨아들이지 않도록 한다. 또한 피펫에 액체를 넣은 채 돌아다니지 않아야 한다. 홀 피펫의 경우에 피펫에 표시된 양을 정확히 얻기 위해서는 액체가 모두 흘러 내린 후 오른손 둘째 손가락으로 피펫의 윗구멍을 막고 왼손으로 피펫의 중앙부분을 가볍게 쥐어 피펫의 끝에 남은 액체를 떨어뜨려야 한다. 눈금 피펫의 경우에는 피펫 끝의 액체를 취하지 않아야 한다.

가장 중요한 것은 필러 사용인데 피펫에 입을 대면 입으로 시약이 들어가거나 시약의 증기가 흡입될 수 있기 때문에 필러를 꼭 사용해야한다. 필러에도 두 가지 종류가 있는데 각각 스포이드 방식, 슬라이드 방식이다. 스포이드 방식 필러는 구멍이 세 개고 구멍마다 용도가 다르지만 복잡하고 익히기도 어려워서 요즘은 그냥 슬라이드 방식을 쓴다. 그냥 필러에 피펫을 꽂아서 옆에 달린 톱니바퀴만 돌리면 액체를 쉽게 취할 수 있기 때문이다.

1.A를 누르고 공기압축주머니를 눌러 밸브의 공기를 빼준다.

2.S를 눌러 액체를 빨아들인다.

3.E를 눌러 액체를 배출한다.

4.E옆의 구멍을 막고 E를 눌러 피펫내의 남은액체를 배출한다.

피펫필러 [ 편집 ]

피펫과 피펫필러의 구조

피펫 관리 [ 편집 ]

검사실에 있는 Micro pipette의 양이 정확하게 분주되는지의 여부를 확인한다. 가변형, 고정형의 피펫의 정확도,정밀도를 측정한다. 검사 방법은 온도와 측량컵의 무게를 측정하고 피펫의 표준 작동법에 따라 증류수를 측량컵에 옮기는 것을 10번 정도 반복하는 것이다. 피펫 사용 후 볼륨을 최대로 맞추어놔야 한다. 피펫은 스프링 구조로 되어있기 때문에 장력에 영향을 줄 수 있기 때문이다.

참고 자료 [ 편집 ]

이 문서에는 다음커뮤니케이션(현 카카오)에서 GFDL 또는 CC-SA 라이선스로 배포한 글로벌 세계대백과사전의 내용을 기초로 작성된 글이 포함되어 있습니다.

스포이트의 놀라운 진화! 피펫(Pipette)

학창시절 과학수업 시간에 자주 사용하던 실험용품 스포이트(Spuit)를 기억하고 계신가요? 윗부분에 달린 고무부분을 엄지와 검지로 꾸욱 누르면 액체가 유리 기둥을 통해 쑤욱 올라오는 원리의 실험도구인데요. 요즘엔 앰플과 같은 화장품 등에서 스포이트 형태의 제품이 출시되고 있어 일상생활에서도 자주 접하고 있습니다. 오늘 토리​가 소개해드릴 싸토리우스의 제품은 스포이드와 똑 닮은 실험기구인 ‘피펫(Pipette)’입니다!

피펫은 아주 아주 세밀한 단위의 액체를 흡입해 식품/화장품/바이오제약 분야의 실험에 큰 공헌을 하고 있는 제품인데요. 피펫의 놀라운 진화이야기가 궁금하시다면, 토리와 함께 신기하고 재미있는 피펫이야기로 함께 여행을 떠나 볼까요~?

● 피펫(Pipette)! 너는 누구니?

키워드에 대한 정보 마이크로 피펫 구조

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